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細(xì)菌接種與分離方法

更新時間:2019-05-13  |  點擊率:991


        根據(jù)待檢標(biāo)本的性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的種類,采用不同的接種方法。

 

        1.平板劃線分離培養(yǎng)法

        對混有多種細(xì)菌,采用劃線分離和培養(yǎng),使原來混雜在一起的細(xì)菌沿劃線在瓊脂平板表面分離,得到分散的單個菌落,以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法:

 

        ①分區(qū)劃線分離法:此法常用于含菌量較多的細(xì)菌的分離。先用接種環(huán)挑取標(biāo)本涂布于瓊脂平板1區(qū)(占培養(yǎng)基總面積的¼)并作數(shù)條劃線,再于2、3、4區(qū)依次劃線。每劃完一個區(qū)域,均將接種環(huán)燒灼滅菌1次,冷后再劃下一區(qū)域,每一區(qū)域的劃線均與上一區(qū)域的劃線交接1~3次。一個成功分區(qū)劃線的平板,培養(yǎng)后分別觀察1區(qū)形成菌苔,2區(qū)菌落連成線,3區(qū)和4區(qū)可分離到單個菌落。

 

        ②連續(xù)劃線分離法:此法常用于含菌量不多的標(biāo)本或培養(yǎng)物中的細(xì)菌分離培養(yǎng)。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕涂抹,然后再用接種環(huán)或拭子在平板表面曲線連續(xù)劃線接種,直至劃滿瓊脂平板表面。

 

        2.瓊脂斜面接種法

        主要用于菌落的移種,以獲得純種進(jìn)行鑒定和保存菌種等。用接種環(huán)(針)挑取單個菌落或培養(yǎng)物,從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一條直線,然后再從底部沿直線向上曲折連續(xù)劃線,直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養(yǎng)基斜面接種,用接種針挑取待鑒定細(xì)菌的菌落,從斜面中央垂直刺入底部,抽出后在斜面上由下至上曲折劃線接種。

 

        3.穿刺接種法

        此法多用于半固體培養(yǎng)基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種,半固體培養(yǎng)基的穿刺接種可用于觀察細(xì)菌的動力。接種時用接種針挑取菌落,由培養(yǎng)基中央垂直刺入至距管底0.4cm處,再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養(yǎng)基,穿刺高層部分,退出接種針后直接劃線接種斜面部分。

 

        4.液體培養(yǎng)基接種法

        用于各種液體培養(yǎng)基如肉湯、蛋白胨水、糖發(fā)酵管等的接種。用接種環(huán)挑取單個菌落,傾斜液體培養(yǎng)管,在液面與管壁交界處研磨接種物(以試管直立后液體淹沒接種物為準(zhǔn))。此接種法應(yīng)避免接種環(huán)與液體過多接觸,更不應(yīng)在液體中混勻、攪拌,以免形成氣溶膠,造成實驗室污染。
 

        5.傾注平板法

        本法主要用于飲水、飲料、牛乳等標(biāo)本中的細(xì)菌計數(shù)。取純培養(yǎng)物的稀釋或原標(biāo)本1ml至無菌培養(yǎng)皿內(nèi),再將已融化并冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基15~20ml傾注入該無菌培養(yǎng)皿內(nèi),混勻,待凝固后置電熱恒溫培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng),長出菌落后進(jìn)行菌落計數(shù),以求出每毫升標(biāo)本中所含菌數(shù)。先數(shù)6個方格(每格為1cm2)中菌落數(shù),求出每格的平均菌落數(shù),并算出平皿直徑,然后按下列公式計數(shù),求出每毫升標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)。

 

        全平板菌落數(shù)=每方格的平均菌落數(shù)×лr2

 

        每ml標(biāo)本中的細(xì)菌數(shù)=全平板菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

 

        6.涂布接種法

        本法多用于紙片擴散法藥敏試驗的細(xì)菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養(yǎng)基表面,然后用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子于不同的角度反復(fù)涂布,使被接種液均勻分布于瓊脂表面,然后貼上藥敏紙片,或直接培養(yǎng),本法經(jīng)培養(yǎng)后細(xì)菌形成菌苔。

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