微生物接種即按無菌操作技術(shù)要求將目的微生物移接到培養(yǎng)基質(zhì)中的過程,接種細(xì)菌應(yīng)用接種針(環(huán))來沾取細(xì)菌標(biāo)本,進(jìn)行接種。一般用右手持筆式較為方便,左手可持培養(yǎng)基進(jìn)行配合,其接種程序可分為:滅菌接種環(huán)→稍冷→沾取細(xì)菌樣品→進(jìn)行接種(包括:?jiǎn)⑸w或塞、接種劃線、加蓋或塞)→進(jìn)行接種環(huán)滅菌等五個(gè)程序。不同培養(yǎng)基,接種方法也不同。
接種常見方法有:平板劃線接種法、斜面接種法、傾注培養(yǎng)法、穿刺接種法、液體接種法。
菌落是由某一微生物的少數(shù)細(xì)胞或孢子在固體培養(yǎng)基表面繁殖后所形成的子細(xì)胞群體,單個(gè)菌體在固體平面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖形成的肉眼可見的群體。因此,菌落形態(tài)在一定程度上是個(gè)體細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)在宏觀上的反映。由于每一大類微生物都有其*的細(xì)胞形態(tài),因而其菌落形態(tài)特征也各異。因此每一大類微生物都有其一定的菌落特征,可通過這些特征差異區(qū)分和識(shí)別。
接種方法
斜面接種法
此法主要用于移種純菌,使其增殖后用于鑒定或保存菌種。通常是從平板培養(yǎng)物上挑取某一單獨(dú)菌落或者從一支已長(zhǎng)好的斜面菌種,移種至斜面培養(yǎng)基上,接種步驟如下:
(一)左手拿兩支試管,一支為經(jīng)滅菌的斜面,另一支為已長(zhǎng)好的菌種。右手持接種環(huán)或接種針通過火焰滅菌后冷卻,并同時(shí)以右手小指和無名指輕輕拔取兩支試管的棉塞或試管帽(先轉(zhuǎn)動(dòng)棉塞后拔去),夾持于手指間。
(二)將試管口通過火焰數(shù)次,并稍轉(zhuǎn)動(dòng),以防止外界的污染。
(三)首先將接種環(huán)伸入有菌試管,使接種環(huán)接觸菌苔取少量菌,取出接種環(huán),立即將管口通過火焰滅菌后將接種環(huán)伸入斜面管內(nèi),先從斜面底部到頂端拖一條接種線,再自下而上的蜿蜒涂布,或直接自斜面底部向上蜿蜒涂布。此步注意接種環(huán)不可碰試管壁和接種時(shí)不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基。
(四)燒試管口,塞好棉塞或蓋好試管帽,將接種環(huán)插到酒精瓶中。
平板劃線接種法(分離培養(yǎng)法)
是將細(xì)菌分離培養(yǎng)的常用技術(shù),其目的是將混有多種細(xì)菌的培養(yǎng)物,或標(biāo)本中不同的細(xì)菌使其分散生長(zhǎng),形成單個(gè)菌落或分離出單一菌株,便于識(shí)別鑒定。平板劃線接種方法較多,其中以分段劃線法與曲線劃線法較為常用。
(一)分段劃線法:本法多用于含菌量較多的標(biāo)本。方法是以接種環(huán)沾取少許樣品先涂布于平板培養(yǎng)基表面一角作為段劃線(劃線時(shí)接種環(huán)與培養(yǎng)基表面呈45度角),然后將接種環(huán)置火焰上滅菌,冷卻(可接觸平板試之,如不融化瓊脂,即已冷卻),于第二段處再作劃線,且在開始劃線時(shí)與段的劃線相交接數(shù)次,以后劃線不必再相接,待第二段劃完時(shí),再如上法滅菌,接種劃線,依次劃至MAX后一段,滅菌接種環(huán)。這樣每一段劃線內(nèi)的細(xì)菌數(shù)逐漸減少,即以獲得單個(gè)菌落,劃線接種完畢,蓋好平皿蓋,倒置(平板底部向上)于37℃溫箱中培養(yǎng)。
(二)連續(xù)劃線法:此法多用于接種材料中含菌數(shù)量不太多的樣品或培養(yǎng)物。方法是先將樣品或培養(yǎng)物涂于平板表面的一角,然后用接種環(huán)自樣品涂擦處開始,向左右兩側(cè)劃開并逐漸向下移動(dòng),連續(xù)劃成若干條分散的平等線。
液體接種法
此法多用于單糖發(fā)酵試驗(yàn)等,接種方法與斜面接種方法基本相同。以左手持培養(yǎng)基與菌種管,右手持接種環(huán)和拔持棉塞,將挑取的菌落或菌液接種于液體培養(yǎng)基內(nèi)。
四大微生物的細(xì)胞形態(tài)和菌落特征比較
細(xì)菌:
細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤(rùn)、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致,邊緣一般看不到細(xì)胞,與培養(yǎng)基不結(jié)合,顏色多樣,菌落外觀形態(tài)小而凸起或大而平坦,菌落透明或稍透明。細(xì)菌的細(xì)胞相互關(guān)系是單個(gè)分散或有一定的排列方式的。它的形態(tài)特征是小二而均勻,個(gè)別有芽孢。細(xì)胞生長(zhǎng)速度一般很快,細(xì)菌一般有臭味。
酵母菌:
大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似,但比細(xì)菌菌落大而凸起,菌落表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠,容易挑起,菌落質(zhì)地均勻,正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一,菌落多為乳白色,少數(shù)為紅色,個(gè)別為黑色,菌落稍透明,不與培養(yǎng)基結(jié)合。菌落邊緣可見球狀,卵圓狀或假絲狀細(xì)胞。氣味多帶酒香味。
放線菌:
放線菌在固體培養(yǎng)基上形成與細(xì)菌不同的菌落特征,放線菌菌絲相互交錯(cuò)纏繞形成質(zhì)地致密的小菌落,干燥、不透明、難以挑取,當(dāng)大量孢子覆蓋于菌落表面時(shí),就形成表面為粉末狀或顆粒狀的典型放線菌菌落,由于基內(nèi)菌絲和孢子常有顏色,使得菌落的正反面呈現(xiàn)出不同的色澤。細(xì)胞相互關(guān)系是絲狀交織,形態(tài)特征細(xì)而均勻,生長(zhǎng)速度慢,常有泥腥味。
霉菌:
由于霉菌的菌絲較粗而長(zhǎng),因而霉菌的菌落較大,有的霉菌的菌絲蔓延,沒有局限性,其菌落可擴(kuò)展到整個(gè)培養(yǎng)皿,有的種則有一定的局限性,直徑1~2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松,外觀干燥,不透明,呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀;菌落與培養(yǎng)基的連接緊密,不易挑?。痪湔疵娴念伾瓦吘壟c中心的顏色常不一致,顏色多樣。菌落邊緣可見粗絲狀細(xì)胞。細(xì)胞相互關(guān)系是絲狀交織,形態(tài)特征粗而分化,細(xì)胞一般生長(zhǎng)較快,氣味往往有霉味。
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