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厭氧菌的培養(yǎng)

更新時(shí)間:2019-05-17  |  點(diǎn)擊率:1998

 

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養(yǎng)。皰肉培養(yǎng)法MAX簡(jiǎn)單,無需特殊設(shè)備。厭氧罐法是應(yīng)用廣泛,是用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境。厭氧袋法在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。厭氧手套箱是一整套系統(tǒng),是適用的厭氧菌培養(yǎng)法,通常用于厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究。

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養(yǎng)。

        在厭氧培養(yǎng)時(shí),通常用培養(yǎng)基中加入還原劑,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢(shì)。常用的厭氧培養(yǎng)方法主要有皰肉培養(yǎng)基法、厭氧罐法、厭氧袋法、厭氧手套箱法等,可根據(jù)實(shí)際情況選用。

        一、皰肉培養(yǎng)基法

        皰肉培養(yǎng)基法是MAX簡(jiǎn)單的厭氧培養(yǎng)法之一,無需特殊設(shè)備。將皰肉和肉湯裝入大試管,在液面加入凡士林封閉,從而造成無氧環(huán)境。在使用前建議將裝有培養(yǎng)基的試管沸水浴10-20min,以使培養(yǎng)基中溶解的氧釋放出來。

        二、厭氧罐法

        厭氧罐法是目前應(yīng)用較廣泛的一種厭氧培養(yǎng)方法,是用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境,從而進(jìn)行厭氧菌的培養(yǎng)。厭氧罐法又分為以下兩種:

        1、抽氣換氣法

        該法適用于一般實(shí)驗(yàn)室,其特點(diǎn)是較經(jīng)濟(jì),可迅速建立厭氧環(huán)境。標(biāo)本接種后,將平板放入?yún)捬豕?,擰緊蓋子,用真空泵抽出罐中空氣,使壓力真空表至-79.98KPa,停止抽氣,充入高純氮?dú)馐箟毫φ婵毡碇羔樆?位。連續(xù)反復(fù)3次,MAX后在罐內(nèi)-79.98KPa的情況下,充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2,亦可獲得好結(jié)果)。罐中需放入冷催化劑鈀粒,可催化罐中殘余的O2和H2化合成水。同時(shí)罐中應(yīng)放有美藍(lán)指示管,美藍(lán)在有氧的環(huán)境下呈藍(lán)色,無氧時(shí)為紅色。臨用前首先將美藍(lán)煮沸使變成無色,放入罐中先呈淺藍(lán)色,待罐中無氧環(huán)境形成,美藍(lán)即可持續(xù)無色。

        2、氣體發(fā)生袋法

        氣體發(fā)生袋系由錫箔密封包裝,其中含有兩種藥片,一種為含枸椽酸和重碳酸氫鈉的藥片,另一種是含有C3H9BNaO3的藥片。前者遇水放出二氧化碳,后者可釋放氫。使用時(shí)在袋的右上角剪一小口,灌進(jìn)10ml蒸餾水,立即放入含有鈀粒、指示劑及平板培養(yǎng)基的厭氧罐中,擰緊蓋子。經(jīng)2-3分鐘后,可感到蓋子微熱并有少量水蒸氣出現(xiàn)。密封后1小時(shí)左右罐中的O2的含量可低于1%。

        三、厭氧袋法

        厭氧袋法即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。該方法不需要特殊設(shè)備,操作簡(jiǎn)單,使用方便,不但實(shí)驗(yàn)室中可用,而且外出采樣,現(xiàn)場(chǎng)接種等也可用。原理與氣體發(fā)生袋法*相同,只是采用塑料袋代替了厭氧罐,氣袋為一透明而密閉的塑料袋,內(nèi)裝有氣體發(fā)生管(有C3H9BNaO3的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。其操作方法為首先將接種的平板培養(yǎng)基放入袋中,盡量擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口。然后先折斷氣體發(fā)生管,20分鐘后再折斷美蘭指示劑管,如果指示劑不變藍(lán)色,說明袋內(nèi)達(dá)到厭氧狀態(tài),即可放入37°C電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

        四、厭氧手套箱法(anaerobic glove box)

        厭氧手套箱是一整套系統(tǒng),是MAX合適的厭氧菌培養(yǎng)法,通常用于厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究。厭氧手套箱是一個(gè)密閉的大型箱,箱的前面有一個(gè)有機(jī)玻璃做的透明面板,板上裝有兩個(gè)手套,可通過手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作。厭氧手套箱可調(diào)節(jié)溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi),還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落。使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,保證箱內(nèi)氣體比例合理。

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養(yǎng)。皰肉培養(yǎng)法MAX簡(jiǎn)單,無需特殊設(shè)備。厭氧罐法是應(yīng)用廣泛,是用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境。厭氧袋法在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。厭氧手套箱是一整套系統(tǒng),是適用的厭氧菌培養(yǎng)法,通常用于厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究。

        厭氧菌在有氧的情況下不能生長,如產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)、肉毒梭菌等厭氧菌,必須在無氧條件下培養(yǎng)。

        在厭氧培養(yǎng)時(shí),通常用培養(yǎng)基中加入還原劑,或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧,以降低氧化還原電勢(shì)。常用的厭氧培養(yǎng)方法主要有皰肉培養(yǎng)基法、厭氧罐法、厭氧袋法、厭氧手套箱法等,可根據(jù)實(shí)際情況選用。

        一、皰肉培養(yǎng)基法

        皰肉培養(yǎng)基法是MAX簡(jiǎn)單的厭氧培養(yǎng)法之一,無需特殊設(shè)備。將皰肉和肉湯裝入大試管,在液面加入凡士林封閉,從而造成無氧環(huán)境。在使用前建議將裝有培養(yǎng)基的試管沸水浴10-20min,以使培養(yǎng)基中溶解的氧釋放出來。

        二、厭氧罐法

        厭氧罐法是目前應(yīng)用較廣泛的一種厭氧培養(yǎng)方法,是用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境,從而進(jìn)行厭氧菌的培養(yǎng)。厭氧罐法又分為以下兩種:

        1、抽氣換氣法

        該法適用于一般實(shí)驗(yàn)室,其特點(diǎn)是較經(jīng)濟(jì),可迅速建立厭氧環(huán)境。標(biāo)本接種后,將平板放入?yún)捬豕?,擰緊蓋子,用真空泵抽出罐中空氣,使壓力真空表至-79.98KPa,停止抽氣,充入高純氮?dú)馐箟毫φ婵毡碇羔樆?位。連續(xù)反復(fù)3次,MAX后在罐內(nèi)-79.98KPa的情況下,充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2,亦可獲得好結(jié)果)。罐中需放入冷催化劑鈀粒,可催化罐中殘余的O2和H2化合成水。同時(shí)罐中應(yīng)放有美藍(lán)指示管,美藍(lán)在有氧的環(huán)境下呈藍(lán)色,無氧時(shí)為紅色。臨用前首先將美藍(lán)煮沸使變成無色,放入罐中先呈淺藍(lán)色,待罐中無氧環(huán)境形成,美藍(lán)即可持續(xù)無色。

        2、氣體發(fā)生袋法

        氣體發(fā)生袋系由錫箔密封包裝,其中含有兩種藥片,一種為含枸椽酸和重碳酸氫鈉的藥片,另一種是含有C3H9BNaO3的藥片。前者遇水放出二氧化碳,后者可釋放氫。使用時(shí)在袋的右上角剪一小口,灌進(jìn)10ml蒸餾水,立即放入含有鈀粒、指示劑及平板培養(yǎng)基的厭氧罐中,擰緊蓋子。經(jīng)2-3分鐘后,可感到蓋子微熱并有少量水蒸氣出現(xiàn)。密封后1小時(shí)左右罐中的O2的含量可低于1%。

        三、厭氧袋法

        厭氧袋法即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。該方法不需要特殊設(shè)備,操作簡(jiǎn)單,使用方便,不但實(shí)驗(yàn)室中可用,而且外出采樣,現(xiàn)場(chǎng)接種等也可用。原理與氣體發(fā)生袋法*相同,只是采用塑料袋代替了厭氧罐,氣袋為一透明而密閉的塑料袋,內(nèi)裝有氣體發(fā)生管(有C3H9BNaO3的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。其操作方法為首先將接種的平板培養(yǎng)基放入袋中,盡量擠出袋內(nèi)空氣,然后密封袋口。然后先折斷氣體發(fā)生管,20分鐘后再折斷美蘭指示劑管,如果指示劑不變藍(lán)色,說明袋內(nèi)達(dá)到厭氧狀態(tài),即可放入37°C電熱恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

        四、厭氧手套箱法(anaerobic glove box)

        厭氧手套箱是一整套系統(tǒng),是MAX合適的厭氧菌培養(yǎng)法,通常用于厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究。厭氧手套箱是一個(gè)密閉的大型箱,箱的前面有一個(gè)有機(jī)玻璃做的透明面板,板上裝有兩個(gè)手套,可通過手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作。厭氧手套箱可調(diào)節(jié)溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi),還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落。使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,保證箱內(nèi)氣體比例合理。

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